使用儀器
本研究使用了The RMC Boeckeler PowerTome。它配備了一個(gè)機(jī)械推進(jìn)系統(tǒng)，該系統(tǒng)具有一個(gè)高重復(fù)性切割臂推進(jìn)的精密數(shù)字線性標(biāo)尺。這款先進(jìn)的超高倍顯微鏡還配有觸摸屏電腦和帶高清攝像頭的三目立體顯微鏡，用于拍攝切片時(shí)的圖片和視頻。該成像系統(tǒng)還有一個(gè)測(cè)量工具，可用于測(cè)量切片尺寸和面積，以便與樣品塊表面的尺寸和面積進(jìn)行比較，從而估算切片壓縮量。

程序

將小鼠脾臟固定在4%甲醛和1%戊二醛中，并后包埋在來(lái)自電子顯微鏡科學(xué)公司（EMS，哈特菲爾德，賓夕法尼亞州，美國(guó)）的Embed 812樹脂中。這是一種常用的EPON812替代樹脂，是許多實(shí)驗(yàn)室中用于生物標(biāo)本的環(huán)氧樹脂混合物的代表。按照制造商的說(shuō)明，使用硬混合物。使用生產(chǎn)PT PCZ超薄切片機(jī)進(jìn)行切片。使用Mitutoyo千分尺（型號(hào)#ID-C112E)，通過(guò)獨(dú)立的方法驗(yàn)證切割臂的機(jī)械前進(jìn)，該測(cè)微計(jì)（千分尺）可以讀取1um增量的線性距離。使用儀器控制器使切片臂前進(jìn)10 um,并將這些距離與Mitutoyo千分尺在切割臂整個(gè)200um前進(jìn)范圍內(nèi)的讀數(shù)進(jìn)行比較。這兩個(gè)讀數(shù)在1%的誤差范圍以內(nèi)。切割臂的機(jī)械推進(jìn)是通過(guò)步進(jìn)電機(jī)和數(shù)字線性推（前）進(jìn)系統(tǒng)的反饋控制來(lái)實(shí)現(xiàn)的，因此，超薄切片的較小推進(jìn)預(yù)計(jì)也同樣準(zhǔn)確。例如，100納米步進(jìn)多個(gè)累加增量導(dǎo)致在Mitutoyo千分計(jì)上的讀數(shù)與1微米和10微米的較大進(jìn)階相同。

在30nm至400nm范圍內(nèi)切割切片，并在切片時(shí)和在CHCI3蒸汽”拉伸”（減壓）后拍照。設(shè)置相機(jī)的增益和曝光設(shè)置，使得生成的圖像與通過(guò)立體顯微鏡直接觀察到的顏色和亮度緊密匹配。使用圖像處理軟件lmageJ（NIH，USA)排列切片圖像，以產(chǎn)生圖2。